乳铁蛋白是一种具有多种生理活性的天然蛋白质，参与调节免疫功能、抗微生物、调节铁吸收、促进肠道细胞增殖分化等多种生理过程。

近日，《GB 5009.299-2024 食品安全国家标准 食品中乳铁蛋白的测定》的发布，规定了食品中乳铁蛋白的提取与检测方法，纳谱分析紧随国标要求，推出了适用于样品前处理的SelectCore Heparin肝素亲和柱和适用于液相色谱分析的ChromCore 300Ǻ C4-T色谱柱，本文依照国标方法进行验证，结果均符合国标要求，为食品中乳铁蛋白的检测提供有效地整体解决方案。

适用范围

本方法适用于巴氏杀菌乳、调制乳、含乳饮料、调制乳粉及乳基婴幼儿配方食品中乳铁蛋白含量的测定。

由色谱图和加标回收率数据可以看出，纳谱分析的SelectCore Heparin肝素亲和柱可以有效净化待测样品，加标回收率符合国标要求；样品净化后的溶液使用ChromCore 300Ǻ C4-T色谱柱进行分析时，峰型良好并且目标物周围无杂峰干扰。

本文按照国标方法验证了SelectCore Heparin肝素亲和柱的柱容量，柱容量均＞95%，满足国标对于柱容量的要求；同时也对ChromCore 300Ǻ C4-T色谱柱进行定量限和标准曲线的验证，定量限为1.0 μg/mL，此浓度与国标标准曲线最低浓度点一致，标准曲线R为0.9995，线性范围为：1.0 μg/mL~ 400.0 μg/mL（相比国标，我们把载量测试的那个浓度点也加进来了）。

Tips：

○柱容量验证时，取5.0 mg/mL牛乳铁蛋白标准储备溶液0.40 mL上样后，可将固相萃取装置上调节阀关闭，使溶液保持2 min后，再打开调节阀，放出溶液；

○样品提取的次数需要多一些，特别是配方奶粉，提取液离心后的残渣还需要提取液多次提取才能提取比较充分；

○纳谱分析的SelectCore Heparin肝素亲和柱采用的是单分散聚甲基丙烯酸酯基质，机械强度高、化学稳定性好，即使小柱流干再次润湿也同样可以保证载量和回收率；

○固相萃取过程中的洗脱步骤需要用4.8 mL磷酸盐缓冲液Ⅰ分两次洗脱；

○纳谱分析的SelectCore Heparin肝素亲和柱采用的是可穿透的上盖，如果需要加体积较大的溶液，可以直接在小柱上面加一个12 mL的SPE上样柱即可（如图3所示）；

图3 肝素亲和柱搭配SPE上样柱

○首次使用ChromCore 300Ǻ C4-T色谱柱时，可能会出现色谱峰型不对称或响应低的情况，此时需要使用高浓度牛乳铁蛋白对照品（400 μg/mL进样100 μL）对色谱柱进行钝化处理，钝化后将色谱柱冲洗至无牛乳铁蛋白的目标峰后，再进行样品分析；

○因为蛋白在C4分析柱上会有一定残留，建议在做柱容量测试后，空针进样两次把蛋白残留降低后再进行后续测试；

○实验观察到部分聚醚砜材质的滤器对乳铁蛋白大概会有10%左右的吸附，目前测试下来，经过Heparin肝素亲和柱净化后的溶液较为澄清，可以不过膜进样。