欢迎登录纳谱分析
欢迎注册纳谱会员

服务与支持

服务与支持

【应用分享】酱鸭和蜜饯中合成着色剂的检测(国标征求意见稿)

image.png


背景

食品合成着色剂,也称为食品合成染料,被广泛应用到食品的加工过程中。鉴于合成着色剂的不安全性,国家加强了对这类合成着色剂的监管,制订了食品合成着色剂的测定标准(GB5009.35-2016)。其中的前处理方法采用的是聚酰胺吸附法测定,但是该方法有一定的局限性,实验中对填料的含水量、操作温度和滴定速度都有一定的要求,且由于该填料对着色剂的吸附力不强而导致回收率数据不稳定,特别是针对复杂基质的着色剂测定,如话梅、肉制品等,数据波动较大。最近更新的国标《食品中合成着色剂的测定(征求意见稿)》将食品中合成着色剂检测种类由7种增加至11种,并且检验方法也进行了调整,采用的是聚合物基质的弱阴离子交换混合模式,针对合成着色剂中含有苯磺酸和苯甲酸结构的离子基团可以更好的结合,保证分析的稳定性。


纳谱分析依据国标的征求意见稿推出了SelectCore WAX固相萃取柱,采用单分散聚乙烯吡咯烷酮基质,活化淋洗洗脱步骤相比其他公司产品可以更快的处理,并且其除杂效果好回收率高且稳定,适用于多个复杂基质样品的检测。


适用范围

参照征求意见稿 中华人民共和国国家标准 食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定,本标准适用于乳及乳制品、冷冻饮品、水果、蔬菜、豆类、食用菌、藻类、坚果以及籽类、可可制品、巧克力和巧克力制品(包括代可可脂巧克力及制品)、糖果、焙烤食品、粮食和粮食制品、肉及肉制品、水产动物及其制品、甜味料、调味品、饮料类、酒类、果冻、膨化食品、茶叶以及食用明胶制品中11种合成着色剂(新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红、赤藓红、柠檬黄、喹啉黄、靛蓝和亮蓝)的测定。

实验步骤

1、试剂的准备

  • 乙醇氨水溶液:量取无水乙醇700 mL,加入4 mL氨水,用水稀释并定容至1 L,混匀。

  • 5%甲醇水溶液:移取甲醇5 mL,用水稀释并定容至100 mL,混匀。

  • 2%氨水甲醇溶液:移取2 mL氨水置于100 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度。

  • 乙酸铵溶液(20 mmol/L):称取1.54 g乙酸铵(精确至0.001 g),加水溶解并定容至1000 mL。

  • 乙酸铵缓冲溶液,pH=9.0:乙酸铵溶液加氨水调pH=9.0。

  • 2%甲酸水溶液:移取甲酸2 mL,用水稀释定容至100 mL。

2、样品的制备

  • 话梅蜜饯提取:准确称取试样2 g(精确至0.001 g),置于50 mL具塞离心管中,加入25 mL乙醇氨水溶液,涡旋1 min,50 ℃超声或振摇(速率≥250 转/分钟)提取20 min,8000 转/分钟离心5 min,取上清液置于50 mL容量瓶中,加入15 mL乙醇氨水溶液重复提取1次,离心后合并上清液,用乙醇氨水溶液定容至50 mL,即得提取液。准确吸取提取液10 mL,50℃下氮气浓缩至2 mL左右,分2~3次共加入10 mL 5%甲醇水溶液溶解,作为待净化液。


  • 酱鸭翅根提取:准确称取试样2 g(精确至0.001 g),置于50 mL具塞离心管中,加入20 mL石油醚,涡旋1 min,超声或振摇(速率≥250 转/分钟)提取10 min,8000 转/分钟离心5 min,弃去上清液,除尽石油醚溶剂,加入25 mL乙醇氨水溶液至除油试样中,涡旋1 min,50 ℃超声或振摇(速率≥250 转/分钟)提取20 min,8000 转/分钟离心5 min(若8000转/分钟 离心后提取液仍然浑浊,可转入高速离心机专用管,15000 转/分钟 离心5 min),取上清液置于50 mL容量瓶中,加入15 mL乙醇氨水溶液重复提取1次,离心后合并上清液,用乙醇氨水溶液定容至50 mL,即得提取液。准确吸取提取液10 mL,50℃下氮气浓缩至2 mL左右,分2~3次共加入10 mL 5%甲醇水溶液溶解,作为待净化液。

3、固相萃取方法

  • 活化:SelectCore WAX 150mg/6mL固相萃取柱,依次使用6 mL甲醇、6 mL水活化;

  • 上样:取步骤2中制备好的待净化液以1.0 mL/min的流速加载在固相萃取柱上;

  • 淋洗:依次用6 mL 2%甲酸水溶液和6 mL甲醇淋洗固相萃取柱,弃去淋洗液,真空抽2 min至柱体近干;

  • 洗脱:用6 mL 2%氨化甲醇溶液洗脱,分两次加入,每次3 mL,收集洗脱液,于50 ℃氮气浓缩至近干,准确加入2 mL pH=9的乙酸铵溶液溶解,溶液用0.45 μm PTFE针式过滤器过滤,弃去2~5滴初滤液,取续滤液作为待测液;

4、高效液相色谱仪器条件

Column:ChromCore C18-AC,5 μm

Dimension:4.6×250 mm

Mobile Phase:A) 乙酸铵溶液(0.02 mol/L)

                         B) 甲醇

Gradient:    t(min)            A%        B%

                    0.01              90         10

                    7.00              87         13

                    17.00            70         30

                    19.00            60         40

                    22.50            55         45

                    30.00            5           95

                    33.00            5           95

                    34.00            90         10

                    42.00            90         10

Flow rate:1.0 mL/min

Temperature:30 °C

Injection:10 μL

Detection:

415 nm(柠檬黄、喹啉黄)

520 nm(新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红和赤藓红)

610 nm(靛蓝、亮蓝)

5、实验谱图


1酱鸭翅根样品

415 nm

图1. 415 nm波长下的合成着色剂标准品、酱鸭翅根样品、酱鸭翅根样品加标(20 mg/Kg)对比图

image.png

Peaks:

  1. 柠檬黄         

  2. 喹啉黄1         

  3. 喹啉黄2         

  4. 喹啉黄3        

  5. 喹啉黄4


520 nm

图2. 520 nm波长下的合成着色剂标准品、酱鸭翅根样品、酱鸭翅根样品加标(20 mg/Kg)对比图

image.png

Peaks:

  1. 苋菜红       

  2. 新红         

  3. 胭脂红       

  4. 日落黄        

  5. 诱惑红       

  6. 酸性红       

  7. 赤藓红


610 nm

图3. 610 nm波长下的合成着色剂标准品、酱鸭翅根样品、酱鸭翅根样品加标(20 mg/Kg)对比图

image.png

Peaks:

  1. 靛蓝         

  2. 亮蓝1        

  3. 亮蓝2

    2.话梅蜜饯样品

415 nm 

图4. 415 nm波长下的合成着色剂标准品、话梅蜜饯样品、话梅蜜饯样品加标(20 mg/Kg)对比图

image.png

Peaks:

  1. 柠檬黄         

  2. 喹啉黄1         

  3. 喹啉黄2         

  4. 喹啉黄3        

  5. 喹啉黄4


520 nm

图5. 520 nm波长下的合成着色剂标准品、话梅蜜饯样品、话梅蜜饯样品加标(20mg/Kg)对比图

image.png

Peaks:

  1. 苋菜红         

  2. 新红         

  3. 胭脂红         

  4. 日落黄        

  5. 诱惑红         

  6. 酸性红       

  7. 赤藓红


610 nm

图6. 610 nm波长下的合成着色剂标准品、话梅蜜饯样品、话梅蜜饯样品加标(20mg/Kg)对比图

image.png

Peaks:

  1. 靛蓝         

  2. 亮蓝1        

  3. 亮蓝2 

6、加标回收率结果

image.png

注:因亮蓝通常呈现为两个峰,喹啉黄通常呈现为四个峰,所以根据标准溶液出峰情况,以各色谱峰总的峰面积之和计算回收率。

7、实验结论

由实验谱图和加标回收率结果可以看出,SelectCore WAX固相萃取柱可以有效去除食品中基质干扰两种难做基质中11种合成着色剂的回收率均在80%~110% 之间,结果准确可靠采用色素分析专用柱ChromCore C18-AC进行分离,色素峰形尖锐对称,分离度完全满足定性和定量要求。


SelectCore WAX固相萃取柱搭配ChromCore C18-AC色素分析专用柱,满足《食品中合成着色剂的测定(征求意见稿)》中11种合成着色剂的检测需求。

详细产品信息:

产品描述

货号

SelectCore WAX 150mg/6mL; 30/pkg

WAX060-060150-1

ChromCore  C18-AC 5μm, 4.6×250mm

S009-050018-04625S

ChromCore C18-AC 5μm, 4.6×10mm

S009-050018-04601S

通用型保护柱卡套 (分体式)

Guard-HPLC-A1