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知识分享 | 干货!液相色谱柱活化方法、维护与注意事项(下)

液相色谱柱通常分为正相柱和反相柱。正相柱大多以硅胶为柱,或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱;反相柱填料主要以硅胶为基质,在其表面键合非极性的十八烷基官能团(ODS)称为C18柱,其它常用的反相柱还有C8、C4、C2和苯基柱等。另外还有离子交换柱、GPC柱、聚合物填料柱等。

液相色谱柱的活化方法、维护与注意事项

上篇文章我们给大家介绍了液相色谱柱的活化和维护方法,今天我们继续来和大家说一说,液相色谱的一些注意事项。

液相色谱柱的注意事项

01

色谱柱使用前注意事项

液相色谱柱的储存液无特殊说明,均为评价报告所示的流动相。在使用前,一定要注意液相色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。在反相色谱中,如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂,应先用10%左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下,否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出,堵塞色谱柱。

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02

流动相

流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯级别的试剂,配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。如果将所配得流动相再经过0.45 μm的滤膜过滤一次则更好,尤其是含盐的流动相。另外,装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。

但如果您实验室中同时有液质与液相的话,建议液质的流动相不要轻易过膜,容易出现交叉污染,或者液质使用专门的过膜仪器。

液相与液质混用过膜装置,导致三乙胺进入质谱,响应突然下降,一定会让您痛不欲生的.....

以常规硅胶为基质的键合相填料通常的pH值适用范围是2.0-8.0。当必须要在pH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时,每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗,并完全置换掉原来所使用的流动相。

不同填料的色谱柱,PH、柱温的范围是不一样的

03

样品

样品也要尽可能清洁,可选用样品过滤器或样品预处理柱(spe)对样品进行预处理;若样品不便处理,要使用保护柱。在用正相色谱法分析样品时,所有的溶剂和样品应严格脱水。

这个看看就可以了,怎么可能每个样品都过膜或用SPE进行处理,先不说麻不麻烦,试验成本就变高了

一般样品高速离心就可以了,但需注意取上清液时,不要取到下面的沉淀物质以及色谱柱前最好加装预柱或在线过滤器

04

色谱柱的存储

(1)正相液相色谱柱存储条件:

1.正相模式建议保存在正己烷中; 

2.HILIC模式建议保存在纯乙腈或90%乙腈/10% 0.1M醋酸铵,pH5溶液中

注意:

1.在使用有机溶剂冲洗前,确保所有缓冲盐都已从色谱柱中冲洗出来。缓冲盐不溶于有机溶剂,会堵塞管路和色谱柱;

2.伯胺基类色谱柱(即氨基柱)不能与酮类物质接触;

3.在HILIC模式下,如果流动相中含有缓冲盐,先用5倍柱体积的20%乙腈/80%去离子水冲洗,然后再用10倍柱体积的纯乙腈冲洗后储存。


(2)反相液相色谱柱存储条件:

短期储存:建议在流动相中储存。

长期存储:建议在80%以上的甲醇或乙腈水溶液中存储(注:C4、C4-T、苯基和PFP在纯乙腈或甲醇中存储)

注意:

1.在使用有机溶剂冲洗前,确保所有缓冲盐都已从色谱柱中冲洗出来。缓冲盐不溶于有机溶剂,会堵塞管路和色谱柱;

2.当流动相pH<2.5或pH>7.0时,应使用长期储存方法。


(3)离子交换色谱柱存储条件:

可以储存于水(含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞)中,并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度最好是室温。

(4)反相色谱柱每天实验后的保养:

使用缓冲液或含盐的流动相,实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟,洗掉色谱柱中的盐,再用甲醇冲洗30分钟。

注意:不能用纯水冲洗柱子,应该在水中加入10%的甲醇,防止将填料冲塌陷。

在使用过程中也最好不要用到纯水比例的流动相,除非是特殊的亲水性柱子,例如:纳谱分析的AQ C18柱,是耐100%水的,不然柱子一不小心就玩坏了.....

所以还是好好爱惜色谱柱吧,没事多冲一冲色谱柱,不然它一发脾气,项目进度就.....玩完了 ~

(本文部分节选于网络,如有侵权请联系删除,谢谢您的配合~)