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【应用分享】中药红花的33种农残测定分析

红花别名红蓝花、刺红花，为菊科植物红花的干燥花，含有较多色素和挥发油类成分，这些成分极易污染GC-MS/MS色谱柱与衬管，从而导致分析时农残目标物峰拖尾、回收率变差、丢峰、保留时间漂移等问题。纳谱分析推出的HLB-C中药农残专用柱，特别适用于重色素和重油脂的中药材农残测定。

今天，我们来看看红花项目的前处理效果吧。



适用范围


本方法参考中国药典2020版2341第五法中的固相萃取法二，适用于含色素、挥发油类成分的中药材的农残检测。


实验步骤


一 / 对照品溶液的制备

1.1 混合对照品配制

精密量取禁用农药混合1 mL，置20 mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用；

1.2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备

取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每1 mL含1.0 mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1 mL含0.1 μg的溶液。

1.3 空白基质溶液的制备

取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。

1.4 基质混合对照溶液的制备

分别精密量取空白基质溶液1.0 mL(6份），置氮吹仪上，40 °C 水浴浓缩至约0.6 mL，分别加入混合对照品溶液10 μL、20 μL、50 μL、100 μL、150 μL、200 μL，加乙腈稀释至1 mL，涡旋混匀，即得。

二 / 供试品溶液的制备

提取（直接提取法）：

精密称取5 g样品（3号筛），加氯化钠1 g，加入50 mL乙腈，匀浆处理2分钟，离心后分取上清液，残渣再加50 mL乙腈，匀浆处理1分钟，离心后，合并两次提取上清液，减压浓缩至3~5 mL左右，加乙腈定容至10 mL，摇匀，待净化。

三 / 净化

GC-MS/MS样品净化：

SPE柱：SelectCore HLB-C中药农残专用柱500mg/6mL

净化：取SelectCore HLB-C固相萃取柱500mg/6mL，加乙腈5 mL活化，再取红花提取液2 mL置已活化的SelectCore HLB-C固相萃取柱中，收集样品液，待所有样品液进入柱体填料后，取5 mL乙腈洗脱，合并样品液与洗脱液，氮吹至2 mL即得。


GC-MS/MS测定：

基质加标配制：精密量取上述氮吹后的样品溶液1 mL，氮吹至0.6 mL加入混合对照溶液，乙腈定容至1 mL，再加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。

样品溶液配制：精密量取上述氮吹后的样品溶液1 mL加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。

LC-MS/MS样品净化：

SPE柱：SelectCore HLB固相萃取柱200mg/6mL

净化：量取上述红花提取液3 mL，过SelectCore HLB固相萃取柱200mg/6mL，收集全部净化液，混匀，即得。

LC-MS/MS测定：

基质加标配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液1 mL氮吹至0.6 mL加入混合对照品液，乙腈定容至1 mL，再加入0.3 mL水，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。

样品溶液配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液1 mL加入0.3 mL水，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。

四 / 气相色谱-串联质谱法（岛津GC-MS-TQ8040 NX）

4.1  色谱条件

色谱柱：NanoChrom BP-50+MS,30m×0.25mm×0.25μm；

进样口温度：250 ℃

升温程序：初始温度为60 ℃，保持1 min；       

                  以10 ℃/min升温至160 ℃；

                  再以2 ℃/min升温至230 ℃; 

                  最后以15 ℃/min升温至300 ℃, 保持6 min；

载气：高纯氦气（纯度>99.999%）；

进样方式：不分流进样；

恒压模式：146 kPa；

进样量：   1 μL

4.2  质谱条件 

电离方式：电子轰击电离源（EI）；

电离能量：70 Ev；

接口温度：250 ℃；

离子源温度：250 ℃；

监测方式：多反应监测模式（MRM）；

溶剂延迟：10.0 min

五 / 高效液相色谱-串联质谱法（岛津LC-MS 8045）

5.1  色谱条件

色谱柱：ChromCore C18-MS Pesticides中药农残专用柱2.6μm,  2.1×100mm;

流动相：

A：0.1%甲酸水溶液（含有5 mmol/L甲酸铵）

B：乙腈:0.1%甲酸水溶液（含有5 mmol/L甲酸铵）=95:5

流速：0.3 mL/min

柱温：40 ℃

进样量：2 µL

梯度：

时间

(min)

流速

(mL/min)

流动相A
(%)
流动相B
(%)
0
0.3
70
30
1
0.3
70
30
12
0.3
0
100
14
0.3
0
100
14.1
0.3
70
30
16
0.3
70
30


5.2  质谱条件

离子源：电喷雾离子源（Electrospray ionization，ESI）正离子扫描

监测方式：多反应监测模式（MRM）

离子源接口电压：4.5 kV

雾化气：氮气3.0 L/min

加热气：干燥空气10.0 L/min

DL温度：250 ℃

加热模块温度：400 ℃

接口温度：300 ℃

干燥气：N2 10 L/min

六 / 注意事项

GC-MS/MS：久效磷参考LC-MS/MS分析结果，内吸磷参考LC-MS/MS分析结果，水胺硫磷参考LC-MS/MS分析结果。 

七 / 实验结果

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红花基质加标GC-MS/MS部分化合物分析结果谱图

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红花基质加标LC-MS/MS部分化合物分析结果谱图

1688111204111920.png

表1  红花中33种农药残留的测定添加回收结果（%）

1688111249162314.png


八 / 实验结论


通过以上实验数据可以看出，红花使用SelectCore HLB-C固相萃取柱处理对其色素类成分、挥发油吸附良好，有效地减轻了样品中色素和挥发油成分对GC-MS/MS柱前端的污染和基质中干扰物对目标物的影响；使用SelectCore HLB固相萃取柱处理的红花LC-MS/MS基质加标液中化合物出峰良好，搭配上述解决办法有效地解决了红花中农残分析中存在的问题，提高了实验效率，为红花的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。

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