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【应用分享】原料乳和乳制品中三聚氰胺的测定 (GB/T 22388-2008)

三聚氰胺（Melamine）化学式为C3H6N6，俗称蛋白精，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，常被用作化工原料，不可用于食品加工或食品添加物。因其分子中含氮量高，曾被不法商人非法添加到食品中，以提高食品检测中的蛋白质含量指标。目前针对乳制品中三聚氰胺检测，常用的方法是GB/T 22388-2008 原料乳和乳制品中三聚氰胺检测方法，但在实际测试过程中，有客户反馈回收率低于90%。因此，纳谱分析对该前处理过程进行了优化，采用SelectCore MCX固相萃取柱和ChromCore C18液相色谱柱快速检测原料乳和乳制品中三聚氰胺，回收率可以稳定在90%以上，是一套高效、快捷、灵敏的整体解决方法包。

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一、适用范围

本方法参照GB/T 22388-2008 原料乳和乳制品中三聚氰胺检测方法，适用于原料乳和乳制品中三聚氰胺的测定。




二、实验步骤 

1、试剂准备

三氯乙酸溶液（1%）：准确称取10 g三氯乙酸于1 L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混匀后备用。

氨化甲醇溶液（5%）：准确量取5 mL氨水和95 mL甲醇混匀后备用。

10 mM辛烷磺酸钠缓冲液：准确称取2.10 g柠檬酸和2.16 g辛烷磺酸钠，加入约980 mL水溶解，调节pH至3.0后，定容到1 L备用。

2、样品前处理

称取2 g试样于50 mL具塞离心管中，加入10 mL三氯乙酸溶液和5 mL乙腈，超声提取10 min，再震荡提取10 min后，用10000 r/min离心10 min后，上清液转移至25 mL容量瓶中；残渣再加入6 mL三氯乙酸溶液，按上述方法进行再次提取，10000 r/min离心10 min后，合并两次提取液，用三氯乙酸溶液定容到25 mL。准确移取5 mL样液，加入5 mL水混匀后做待净化液。然后将待净化液按下述固相萃取方法进行处理，所得样品供高效液相色谱测定。

3、固相萃取方法

SelectCore MCX固相萃取柱60mg/3mL；

活化：依次使用3 mL甲醇、3 mL水活化；

上样：将制备好的待净化液转移至固相萃取柱中；

淋洗：依次使用3 mL水、3 mL甲醇淋洗，结束后抽至近干；

洗脱：用6 mL氨化甲醇溶液洗脱，收集洗脱液；

复溶：洗脱液于50 ℃下氮气吹干，残留物用1 mL流动相定容，涡旋混合1 min，过微孔滤膜后，供HPLC测定。

*注：整个固相萃取过程流速不超过1 mL/min

4、液相色谱条件

色谱柱：ChromCore C18 5μm, 4.6×250mm

流动相：90/10 v/v 10 mM辛烷磺酸钠缓冲液/乙腈

流速：1 mL/min

柱温：40 °C

波长：240 nm

进样量：20 μL



三、实验谱图及加标回收率数据

样品1、液态奶实验谱图

image.png

图2. 不同品牌MCX固相萃取柱净化对比谱图（加标量: 2 mg/kg）


加标回收率数据

样品

60 mg/3 mL

加标量

mg/kg

回收率

%

国外W公司MCX 

2

91.75

国产A公司MCX 

2

88.38

SelectCore MCX

2

94.37

样品2、奶粉实验谱图

image.png


图3. 不同品牌MCX固相萃取柱净化对比谱图（加标量: 2 mg/kg）

加标回收率数据

样品

60 mg/3 mL

加标量

mg/kg

回收率

%

国外W公司MCX 

2

97.91

国产A公司MCX 

2

90.24

SelectCore MCX

2

95.94



四、实验结论

由实验谱图及加标回收率数据可知，纳谱分析的SelectCore MCX固相萃取柱可以有效去除样品基质干扰，并且回收率符合检测要求，回收率和除杂效果与国外W品牌相当，优于国产A品牌。样品净化后的溶液使用ChromCore C18色谱柱进行分析时，峰型良好并且目标物周围无杂峰干扰。

实验注意事项：

1、过滤纸容易造成损失；

2、若待净化液浑浊，可以考虑再次离心，避免上样过程中堵柱子，导致过柱时间太长；

3、增加提取次数可以提高提取效率。

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