一. 找到目标化合物的峰

综合以上所选择的一些条件作为初始条件，就可以开始下一步的目标——“找到目标化合物峰”。要找到目标化合物的峰，首先就要在我们最熟悉的C18柱上面测试一下，了解化合物的保留能力和大致的极性。

具体的步骤是：先用纯甲醇做流动相，看化合物是否被洗脱下来，如果被洗脱下来峰高是多少，收集这些数据；

然后流动相中甲醇的比例以10％的速度递减，即甲醇：水＝90:10、80:20、70:30......纯水，看流动相从最初的100％甲醇——100％水的过程中每变动10％的比例，谱图上会多些什么峰，峰高会不会发生变化，多出来的峰是从哪里来的；

这个过程会有三种结果：

1）纯甲醇条件下没能洗脱下来，这样说明化合物的极性很弱，保留能力非常强，应该可以考虑用正相体系来做，如选择硅胶柱；

2）纯水条件下很难出峰而纯甲醇时很快洗脱下来，这意味着我们可以通过调整流动相的比例找到这个峰，并结合前面流动相比例10％变化的系列数据，选择合适的流动相。

3）纯水条件下也仍然很快就出峰，这说明化合物的极性很强，此时需要结合分子的结构式来判断，有可能是哪些基团导致了样品这么快的出峰，然后采取相应的对策，考虑添加缓冲盐，调节pH，如果需要的话，甚至考虑添加离子对试剂。

通常带有－NH₂、－NHR、－NR₂等基团的时候添加含－SO₃－磺酸基的离子对试剂（如辛烷磺酸钠）以增强保留，而带有－SO₃－、－PO₄－等极性基团的化合物，则需添加如四丁基溴化铵、四丁基氢氧化铵等含N^＋R₄的离子对试剂。

二. 调整峰形

三. 进一步完善方法