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服务与支持

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14种喹诺酮类药物的残留检测


背景

养殖环节用药不当是造成兽药残留的最主要原因尽管我国农业部对养殖方法有明文规定,但是总有养殖户为了追求最大的经济效益,违背相关法律法规进行养殖,例如将禁用药物盐酸克伦特罗当作添加剂添加到猪饲料中从而引起瘦肉精中毒兽药残留产生的危害会影响很多方面,最要的是会在人体内蓄存以致发生急慢性中毒;对于动物体而言,反复接触抗菌药物,其体内的敏感菌株会产生抗药性,使得常规药物在临床上的治疗效果越来越差;其次,接触了药物以后的动物,它们的粪便和尿液随着排泄会稳定的存在于在周围环境中,从而造成环境污染。

 

适用范围

 本方法参照GB/T21312-2007)适用于猪肉、猪肝、猪肾、牛奶、鸡蛋等动物源食品中氟罗沙星、氧氟沙星、依诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、达氟沙星、奥比沙星、双氟沙星、沙拉沙星、司帕沙星、奥索利酸、萘啶酸、氟甲喹14种喹诺酮类兽药残留的检测。

实验步骤

1、试剂准备

甲醇CH3OH):色谱纯

乙腈(CH3CN):色谱纯

乙二胺四乙酸二钠(EDTA):色谱纯

甲酸(HCOOH):色谱纯

水:GB/T 6682规定的一级水

柠檬酸:分析纯

磷酸氢二钠:分析纯

1-1、仪器

1·高效液相色谱-串联质谱仪

2·电子天平:感量0.0001 g

3·电子天平:感量0.01 g

4·旋涡混合器

5·冷冻离心机

6·聚丙烯离心管

7·氮吹仪

8·固相萃取装置

1-2溶液配制

5%甲醇水溶液:准确量取5 mL的甲醇,倒入100 mL的容量瓶中,用水溶液定容至刻度,摇匀。

0.2%甲酸水:取2 mL的甲酸,加入1000 mL容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀。

0.1%甲酸水:取1 mL的甲酸,加入1000 mL容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀。

0.1 mol/L柠檬酸水溶液:准确称取21.01 g柠檬酸,加入1000 mL容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀

0.2 mol/L磷酸氢二钠水溶液:准确称取71.63 g磷酸氢二钠,加入1000 mL容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀

Mcllvaine 缓冲溶液:将1000 mL0.1 mol/L柠檬酸水溶液与625 mL0.2 mol/L磷酸氢二钠水溶液混合,必要时用盐酸或者氢氧化钠调节pH4.0±0.05

0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine 缓冲溶液准确称取60.5 g乙二胺四乙酸二钠,放入1625 mLMcllvaine 缓冲溶液中,摇晃混匀。

 

2、样品提取

牛奶和鸡蛋

称取均质试样5.0 g(精确到0.01 g置于50 mL离心管中加入40 mL 0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine 缓冲溶液1000 r/min涡旋混合1 min,超声提取10 min10000 r/min离心5 min(温度低于5 上清液。

 

3、净化

SPE柱:SelectCore HLB固相萃取柱(200mg/6mL

活化:依次用6 mL的甲醇和水活化

上样:加入提取好全部上清液;

淋洗:2 mL5%甲醇水溶液进行淋洗,淋洗结束后再减压抽干

洗脱:6 mL 甲醇溶液进行洗脱洗脱液在40 ℃下用氮气吹1 mL 0.2%甲酸水复溶后过0.22 μm有机滤膜上机

 

4、液相色谱仪器条件

Column     ChromCoreTM C183μm

Dimension:   2.1×100mm

Mobile phase A0.1% Formic acid in D.I. Water 0.1%甲酸水溶液BAcetonitrile (乙腈)

Gradient

tmin

A

B

Flow ratemL/min

0.00

90

10

0.400

1.00

70

30

0.400

4.00

30

70

0.400

6.00

0

100

0.400

8.00

0

100

0.400

8.10

90

10

0.400

12.00

90

10

0.400

Flow rate    0.4 mL/min

Temperature 40 °C

Injection    1 μL

 

5质谱条件

离子源: 电喷雾离子源Electrospray ionizationESI离子扫描

监测方式:多反应监测(Multiple Reaction MonitoringMRM

雾化气流量:3 L/min

加热器流量:10 L/min

干燥气流量:10 L/min

接口温度:300

DL温度:250

加热块温度:400

 

6实验谱图

image.png

样品加标回收率实验结果(添加水平为4. 0 μg/kg

样品名称

化合物(中文)

化合物(英文)

保留时间min

m/z

加标量(μg/kg

平均回收率%

1

依诺沙星

enoxacin

2.659

321.0>303.0

4.0

84.05

2

氟罗沙星

fleroxacin

2.865

369.9>326.0

4.0

105.06

3

诺氟沙星

norfloxacin

2.943

320.0>302.0

4.0

90.93

4

氧氟沙星

ofloxacin

2.957

362.1>318.2

4.0

90.67

5

环丙沙星

ciprofloxacin

3.080

331.9>314.0

4.0

88.76

6

达氟沙星

danofloxacin

3.233

357.9>340.0

4.0

81.96

7

恩诺沙星

enrofloxacin

3.307

360.0>342.1

4.0

93.79

8

奥比沙星

orbifloxacin

3.351

395.90>352.1

4.0

85.79

9

沙拉沙星

sarafloxacin

3.468

386.1>368.0

4.0

86.96

10

双氟沙星

difloxacin

3.493

399.9>355.9

4.0

109.01

11

司帕沙星

sparfloxacin

3.507

393.0>349.2

4.0

105.15

12

噁喹酸

oxolinic acid

4.060

261.9>244.1

4.0

114.85

13

萘啶酸

nalidixic acid

4.589

232.9>215.0

4.0

93.26

14

氟甲喹

flumequin

4.697

261.9>243.9

4.0

108.13


7、实验结论

由以上数据和图谱可知,纳谱分析SelectCore HLB小柱能有效去除杂质的干扰,对目标物质有良好的保留和洗脱能力,回收率也较好,符合国标动物源性食品中14种喹诺酮类兽药残留的检测要求。