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服务与支持

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【应用分享】酸枣仁中黄曲霉毒素总量的提取与检测

我国是中药材生产和应用的大国,发霉现象在中药材的种植、加工、贮藏等系列环节中普遍存在,由此导致的真菌毒素污染会严重影响中药的质量及安全,虽然可以通过一系列的防治技术来避免中药材被真菌毒素污染,但有效的检测方法也是控制中药材质量安全必不可少的环节。纳谱分析紧跟药典要求,推出了适合中药材中黄曲霉毒素总量供试品制备的SelectCore AFT Total免疫亲和柱及适合黄曲霉毒素检测的ChromCore 120 C18色谱柱。

适用范围

本方法参照中国药典2020版 2351 真菌毒素测定法 黄曲霉毒素测定法 第一法(液相色谱法),适用于远志、大枣、肉豆蔻、决明子、麦芽、陈皮、使君子、柏子仁、胖大海、莲子、桃仁、槟榔、酸枣仁、薏苡仁、水蛭、地龙、全蝎、蜈蚣、僵蚕等多种中药材中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的提取与检测。


实验步骤

一 / 溶液配制

淋洗缓冲液:称取8.0 g氯化钠、1.2 g磷酸氢二钠、0.2 g磷酸二氢钾、0.2 g氯化钾,加水990 mL使溶解,用盐酸调节pH值至7.0,加水稀释至1000 mL,即可。

二 / 样品制备

取供试品粉末约5 g(过二号筛),精密称定,置于50 mL离心管中,加入氯化钠1 g,精密加入70%甲醇水溶液25 mL,高速搅拌2分钟(搅拌速度大于11000 r/min),离心5分钟(离心速度4000 r/min),精密量取上清液15 mL,置50 mL量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,离心10分钟(离心转速4000 r/min),取上清液备用。

三 / 固相萃取方法

SelectCore AFT Total 免疫亲和柱 3mL

亲和柱预处理:取出亲和柱,恢复至室温(22-25 °C),亲和柱连接于注射器下,打开下端堵头,将柱内保存液流尽;
上样:精密量取样品制备中的上清液20 mL注入注射器筒中,通过免疫亲和柱,流速每分钟3 mL;
淋洗:依次使用淋洗缓冲液10 mL、水10 mL淋洗,弃去淋洗液,使空气进入柱子,将水挤出柱子;
洗脱:准确加入1.5 mL甲醇洗脱亲和柱,收集洗脱液,置2 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,过0.22 μm尼龙针式滤器,即得。

四 / 液相色谱-光化学柱后衍生器-荧光检测器条件

Column:ChromCore 120 C18 5μm, 4.6×250mm;

Mobile Phase:30/15/55 v/v/v甲醇/乙腈/水

Flow rate:1.0 mL/min

Temperature:30 °C

Injection:50 μL

光化学柱后衍生器:254 nm

Detection:

            EX:360 nm

            Em:450 nm

实验谱图

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图1、4种黄曲霉毒素标准品、酸枣仁样品、酸枣仁样品加标对比图

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加标回收率

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五 / 实验结论

本文按照中国药典2020版要求,对酸枣仁供试品溶液进行制备,并进行了液相色谱分析,谱图基线稳定,两个相邻色谱峰的分离度均大于1.5,酸枣仁供试品加标回收率也满足检测要求。

相关产品信息    

色谱柱货号

产品描述

货号

ChromCore 120 C18 5μm, 4.6×250mm

A001-050012-04625S

SelectCore AFT Total免疫亲和柱 黄曲霉毒素总量(B族G族), 3mL, 25/pkg

AFTT100-030300-2

保护柱及柱芯

产品描述

货号

ChromCore 120 C18 5μm, 4.6x10mm
A001-050012-04601S-B1

通用型保护柱卡套(分体式)

Guard-04601S-C1