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【应用分享】中药大黄的33种农残测定分析

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中药大黄

大黄为蓼科植物掌叶大黄，唐古特大黄、药用大黄的干燥根和根茎，含有大量的蒽醌类成分，这些成分极易污染GC-MS/MS柱前端，造成目标物拖尾、丢峰、回收率不达标等问题，且常规净化小柱无法有效地去除这些蒽醌类成分。纳谱分析推出的GCB/NH2-A产品，适用于黄连、黄柏、大黄的气质质前处理分析。

今天，我们一起来看看大黄项目的前处理效果吧。

适用范围

本方法参考中国药典2020版2341第五法中的 固相萃取法二 和 固相萃取法三，适用于含色素、挥发油类成分的中药材的农残检测。


实验步骤

一 / 对照品溶液的制备

1.1 混合对照品配制
精密量取禁用农药混合1 mL，置20 mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用；
1.2 气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备
取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每1 mL含1.0 mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1 mL含0.1 μg的溶液。
1.3 空白基质溶液的制备
取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。
1.4 基质混合对照溶液的制备
分别精密量取空白基质溶液1.0 mL（6份），置氮吹仪上，40 °C 水浴浓缩至约0.6 mL，分别加入混合对照品溶液10 μL、20 μL、50 μL、100 μL、150 μL、200 μL，加乙腈稀释至1 mL，涡旋混匀，即得。

二 / 供试品溶液的制备

2.1 提取（直接提取法）

精密称取5 g样品（3号筛），加氯化钠1 g，加入50 mL乙腈，匀浆处理2分钟，离心后分取上清液，残渣再加50 mL乙腈，匀浆处理1分钟，离心后，合并两次提取上清液，减压浓缩至3~5 mL，加乙腈定容至10 mL，摇匀，待净化。

三 / 净化

3.1  GC-MS/MS 样品 

SPE柱：SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱 500mg/500mg/6mL

净化：取SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱，用乙腈：甲苯（3：1）10 mL活化，量取上述大黄提取液2 mL，置已活化的SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱中，用乙腈：甲苯（3：1）20 mL洗脱，收集全部样品液与洗脱液，40 ℃水浴减压回收至2 mL，即得。

测定：
基质加标配制：精密量取上述减压回收后的样品溶液1 mL，氮吹至0.6 mL加入混合对照溶液，乙腈定容至1 mL，再加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。
样品溶液配制：精密量取上述减压回收后的样品溶液1 mL加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。

3.2  LC-MS/MS 样品 

SPE柱：SelectCore HLB 固相萃取柱 200mg/6mL

净化：量取上述大黄提取液3 mL，过SelectCore HLB 固相萃取柱，收集全部净化液，混匀，即得。

测定：

基质加标配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液1 mL氮吹至0.6 mL加入混合对照品液，乙腈定容至1 mL，再加入0.3 mL水，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。

样品溶液配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液1 mL加入0.3 mL水，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。

四 / 气相色谱-串联质谱法（岛津 GC-MS-TQ8040 NX）

4.1  色谱条件 

气相色谱柱：NanoChrom BP-50+MS，30m×0.25mm×0.25μm;

进样口温度：250 ℃；

升温程序：初始温度为60 ℃，保持1 min；

                 以10 ℃/min升温至160 ℃；

                 以2 ℃/min升温至230 ℃；

                 以15 ℃/min升温至300 ℃，保持6 min；

载气：高纯氦气（纯度>99.999%）；

进样方式：不分流进样；

恒压模式：146 kPa；

进样量：1 μL

4.2  质谱条件 

电离方式：电子轰击电离源（EI）；

电离能量：70 Ev；

接口温度：250 ℃；

离子源温度：250 ℃；

监测方式：多反应检测模式（MRM）；

溶剂延迟：10.0 min

五 / 高效液相色谱-串联质谱法（岛津 LC-MS 8045）

5.1  色谱条件

液相色谱柱：ChromCore C18-MS Pesticides 2.6μm, 2.1×100mm；
流动相：A: 0.1%甲酸水溶液（含有5 mmol/L甲酸铵）;
               B: 乙腈-0.1%甲酸水溶液（含有5 mmol/L甲酸铵）=95:5；
流速：0.3 mL/min；
柱温：40 ℃；
进样量：2 µL；
梯度：

时间

（min）

流速

（mL/min）

流动相A

（%）

流动相B

（%）

0

0.3

70

30

1

0.3

70

30

12

0.3

0

100

14

0.3

0

100

14.1

0.3

70

30

16

0.3

70

30

5.2  质谱条件

离子源：电喷雾离子源（Electrospray ionization，ESI）正离子扫描

监测方式：多反应监测（Multiple Reaction Monitoring，MRM）

离子源接口电压：4.5 kV

雾化气：氮气3.0 L/min

加热气：干燥空气10.0 L/min

DL温度：250 ℃

加热模块温度：400 ℃

接口温度：300 ℃

干燥气：N2 10 L/min

六 / 实验结果

GC-MS/MS：由于SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱对久效磷有一定吸附容易导致其回收率偏低，故久效磷参考LC-MS/MS分析结果。 

七 / 实验结果

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大黄基质加标GC-MS/MS部分化合物分析结果谱图

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固相萃取法3处理大黄基质LOQ浓度点加标谱图（GC-MS/MS方法）

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大黄基质加标LC-MS/MS部分化合物分析结果谱图

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固相萃取法2处理大黄基质LOQ浓度点加标谱图（LC-MS/MS方法）

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表1  大黄中33种农药残留的测定添加回收结果（%） 

image.png

八 / 实验结论

通过以上实验数据可以看出，大黄使用SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱处理对其色素类和蒽醌类成分吸附良好，有效地减轻了样品中蒽醌类成分对GC-MS/MS柱前端的污染和基质中干扰物对目标物的影响；使用SelectCore HLB 固相萃取柱处理的大黄LC-MS/MS基质加标液中化合物出峰良好，搭配上述解决办法有效地解决了大黄农残检测中存在的问题，提高了实验效率，为大黄的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。

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